An improved method for genomic DNA extraction from strawberry leaves / Otimização de um método para extração de DNA genômico a partir de folhas de morangueiro

Several extraction methods of genomic DNA for identification and characterization of genetic diversity in different plant species are routinely applied during molecular analysis. However, the presence of undesirable compounds such as polyphenols and polysaccharides is one of the biggest problems faced during the isolation and purification of high quality DNA in plants. Therefore, achievement of fast and accurate methods for DNA extraction is crucial in order to produce pure samples. Leaves of strawberry genotypes (Fragaria ananassa) have high contents of polysaccharides and polyphenols which increase the sample viscosity and decrease the DNA quality, interfering with the PCR performance. Thereby, in this study we evaluated the quality and amount of genomic DNA extracted from young leaves of strawberry after tissue lyophilization and maceration in presence of polivinilpirrolidone (PVP). The CTAB method was used as reference procedure and it was modified to improve the DNA extraction. The modifications consisted of tissue lyophilization overnight until it was completely freeze-dried and addition of PVP during the tissue maceration in liquid nitrogen. The results showed the efficiency and reliability of the modified method compared to the unmodified method, indicating that combination of lyophilization and PVP improve the quality and amount of the DNA extracted from strawberry leaves.

Vários métodos de extração de DNA genômico para a identificação e caracterização da diversidade genética em diferentes espécies de plantas são rotineiramente aplicados durante a análise molecular. Entretanto, a presença de compostos indesejáveis, tais como polifenóis e polissacarídeos, é um dos maiores problemas que ocorrem durante o isolamento e purificação de DNA de alta qualidade em plantas. Dessa forma, o sucesso no desenvolvimento de métodos de extração de DNA rápidos e acurados é crucial para produzir amostras puras. Folhas de genótipos de morangueiro (Fragaria ananassa) têm elevado conteúdo de polissacarídeos e polifenóis que aumentam a viscosidade da amostra e reduzem a qualidade do DNA, interferindo no desempenho da PCR. Neste estudo, avaliamos a qualidade e a quantidade de DNA genômico extraído de folhas jovens de morangueiro após a liofilização do tecido e a maceração na presença de polivinilpirrolidona (PVP). O método CTAB foi utilizado como procedimento de referência e foi modificado para melhorar a extração do DNA. As modificações consistiram na liofilização do tecido a baixa temperatura até que ele tivesse sido desidratado completamente, associada à adição de PVP durante a maceração do tecido no nitrogênio líquido. Os resultados demonstraram a eficiência e a confiabilidade do método modificado comparado ao método não modificado, indicando que a combinação da liofilização com PVP melhora a qualidade e quantidade do DNA extraído de folhas de morangueiro.

Germinação de embriões e crescimento inicial in vitro de macaúba / Germination and early growth of embryos of macaúba seedlings

A macaúba é uma palmeira oleaginosa altamente produtiva e seu óleo pode ser usado na produção de biocombustíveis. O presente trabalho teve como objetivos avaliar a influência de concentrações dos sais do meio de cultura MS e de água de coco na germinação in vitro de embriões zigóticos de macaúba e no crescimento inicial de plântulas. Os embriões foram excisados e em seguida inoculados em tubos de ensaio contendo 15mL de meio de cultura MS nas concentrações de 50 e 100 por cento de sais minerais, acrescidos de água de coco (0, 50, 100 e 150mL L-1). As culturas foram mantidas em sala de crescimento com irradiância em torno de 42W m-2, temperatura de 25±2°C e fotoperíodo de 16 horas. Maior porcentagem de germinação de embriões de macaúba foi obtida aos 60 dias, em meio MS, na concentração original dos sais. O crescimento e a conversão de plântulas viáveis ou normais, passíveis de serem aclimatizadas, requerem metade da concentração de sais do meio MS suplementado com 50mL L-1 de água de coco.

The macaw is a palm oleaginous that it is highly productive and in which their oil can be used to produce biofuels.This study aimed to evaluate the influence of concentrations of minerals of the culture medium MS and coconut water germination in vitro of zygotic embryos of macaw and initial growth of seedlings. The embryos were inoculated in test tubes containing 15mL of culture medium MS in concentrations of 50 and 100 percent of minerals, plus coconut water (0, 50, 100 and 150mL L-1). The cultures were kept in room for growth with irradiance around 42W m-2, at 25±2°C and photoperiod of 16 hours. Higher percentage of germination of embryos of 'macaúba' was obtained at 60 days in MS medium in the original concentration of salts. The growth and conversion to viable seedlings or normal, which can be acclimatized, require half the concentration of salts of MS medium supplemented with 50mL L-1 coconut water.

Análise bioquímica de calos de pinhão-manso / Biochemical analysis of callus from physic nut

O pinhão-manso (Jatropha curcas L.) vem ganhando importância por seu potencial como insumo ao biodiesel. Estudos visam à adequação agronômica e a cultura de tecidos contribui indiretamente com este aspecto, auxiliando em pesquisas aplicadas como em biotecnologia, em situações que visam à regeneração de plantas. Nesse intuito, é fundamental avaliar, durante os períodos de cultivo dos calos, o comportamento dos metabólitos primários. A massa calogênica, por ocasião da inoculação, não apresentou reserva na forma de carboidratos. Aos 42 dias iniciou a absorção da sacarose do meio, enquanto o acúmulo no explante ocorreu a partir dos 98 dias de cultivo. O teor de aminoácidos foi alto no dia da inoculação e, por volta dos 98 dias, tanto os níveis de aminoácidos quanto os de proteínas decresceram.

The physic nut (Jatropha curcas L.) is gaining importance because of its potential as raw material for biodiesel. Studies aiming the adequacy of agronomic techniques and tissue culture contribute, indirectly, to this aspect, helping applied research as biotechnology, in situations that aim plant regeneration. Therefore, it is essential to evaluate, the behavior of primary metabolites during the callus growing season. The callus mass at the inoculation time showed no carbohydrates reserve. At the 42nd day the sucrose absorption started in the medium, while the accumulation in the explant occurred from the 98th day of cultivation. Amino acid content was high at the inoculation's day and around the 98th day, both amino acids and protein levels decreased.